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罗非鱼专题,中国农业网

发布时间:2019-11-30 16:09编辑:三农焦点浏览(122)

    最近几年全球范围内链球菌感染多种海水和淡水养殖鱼类并引起暴发性疾病的报道呈现增加趋势,尤其在亚洲的罗非鱼养殖地区报道较多,无乳链球菌已给亚洲的罗非鱼养殖业造成了严重的危害。本文就罗非鱼无乳链球菌病的流行情况、临床症状、病原性特征、致病机理、诊断方法和防治措施作简要介绍。

    2010年4月份,罗非鱼链球菌病在海南省即呈点状发生,说明链球菌病的发生时节在不断延伸,也意味链球菌病可能在2010年广泛流行。

    核心提示:本文就罗非鱼无乳链球菌病的流行情况、临床症状、致病机理、诊断方法和防治措施作一简介,为广大基层水产工作者和养殖户对罗非鱼无乳链球菌病的防控提供借鉴。 中国水产门户网报道本文就罗非鱼无乳链球菌病的流行情况、临床症状、致病机理、诊断方法和防治措施作一简介,为广大基层水产工作者和养殖户对罗非鱼无乳链球菌病的防控提供借鉴。 四川农业大学动物医学院院长,博士生导师。四川省学术与技术带头人,四川省有突出贡献的优秀专家。中国兽药典委员会委员,农业部新兽药评审委员会委员,中国动物病理学会常务理事,国家重要核心期刊《水产学报》编委会委员,四川省鱼病研究会主任,四川省动物防疫协会副会长。 主编、副主编和参编《现代禽病诊断与防治全书》、《鱼病防治手册》、《鱼病防治与安全用药》、《养鱼全书》、《水生动物病害学》、《新编渔药手册》、《动物病理学》、《兽医诊疗新技术》、《水产养殖用药处方大全》、《鱼类疾病彩色诊疗图谱》和《斑点叉尾鮰疾病彩色诊疗图谱》等专着和教材11部。 自2009年以来,我国南方多个省市暴发了罗非鱼链球菌病,其发病率高达40%,死亡率接近100%;链球菌一度被人喻为罗非鱼世界的“H1N1”。在不少养殖地区经常可见由于疾病暴发而倾家荡产的养殖户,疾病的发生严重挫伤了养殖户养殖积极性,也给当地罗非鱼饲料销售商、出口商以及渔政部门等相关利益方带来极大的困扰;病害也给当地罗非鱼产业造成巨大的经济损失。 广大罗非鱼养殖户与行业行政主管部门都急切呼吁尽快搞清罗非鱼链球菌病的病原学特性及其致病机理,同时建立特异性强、灵敏度高的诊断方法,筛选有效的防治药物,研制安全、高效的新型疫苗等,以降低疾病对罗非鱼养殖的危害,促进罗非鱼养殖的健康发展。 本文就罗非鱼无乳链球菌病的流行情况、临床症状、致病机理、诊断方法和防治措施作一简介,为广大基层水产工作者和养殖户对罗非鱼无乳链球菌病的防控提供借鉴。 一、病原学特征 无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)亦称GBS,属于链球菌科链球菌属,为B群链球菌,革兰氏阳性,呈链状或成对排列的球菌。其在自然界中分布广泛,普遍存在于水,动物体表,泌尿生殖道和乳汁中,对哺乳动物、爬行动物、两栖动物和鱼类均有致病性,是一种人-兽-鱼共患病病原。无乳链球菌可引起新生儿的败血症、肺炎和脑膜炎,奶牛乳腺炎和鱼的脑膜炎,给人类的健康带来威胁,也给家畜和水产养殖业造成严重的经济损失。 无乳链球菌菌体为圆形或卵圆形,直径约为2μm,链状或成对排列,在肉汤内对数生长期,常呈成长链排列,无鞭毛,无芽孢,无运动性。无乳链球菌为兼性厌氧菌,过氧化氢酶阴性。在血液琼脂平板上培养18h-24h后,形成淡灰白色、隆起、闪光的小菌落。大多数无乳链球菌菌株在10℃或45℃或pH9.6的条件下不生长,最适温度为36℃-37℃,最适pH为7.4-7.6。在普通培养基中生长不良,在血液琼脂培养基,脑心浸液培养基等营养成分较高的培养基中生长良好,能在含40%胆汁的培养基中生长,不能在6.5%NaCl中生长。 大部分无乳链球菌菌株呈β-溶血,但也有α-或γ-溶血。能水解马尿酸钠,精氨酸,不水解七叶苷,能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、海藻糖产酸不产气,只在好氧条件下发酵甘油,不发酵木糖、阿拉伯糖、棉子糖、菊糖、甘露醇和山梨醇。 根据细菌表面荚膜多糖抗原不同将无乳链球菌分为Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ-Ⅸ10种血清型。其中血清型Ⅰa、Ⅲ、Ⅴ已被报道是引起人类疾病的主要血清型,血清型Ⅰa、Ⅰb和Ⅲ型是感染鱼类的主要血清型。 二、疾病流行情况 近几年来,全球范围内无乳链球菌感染多种海水和淡水养殖鱼类并引起暴发性疾病的报道呈现增加趋势,尤其在亚洲的罗非鱼养殖地区报道较多,无乳链球菌已给亚洲的罗非鱼养殖业造成了严重的危害。中国、泰国、马来西亚、科威特等国均暴发了严重的罗非鱼无乳链球菌病,有较高的发病率和死亡率。 本病在我国南方地区5-10月的高温期容易流行,流行水温25-37℃,发病率达20%-30%,发病鱼的死亡率可高达60%-100%;水温降至20℃以下时则发病较少;在高水温季节时,病鱼的死亡高峰期可持续2-3周,在低水温季节,病鱼呈慢性发病,死亡率降低,但持续时间长。疾病主要威胁100g以上的稚鱼到1kg左右的成鱼;无乳链球菌病主要以水平方式传播,体表有损伤或受环境应激过大的鱼易感染发病。 暴发无乳链球菌病的罗非鱼往往伴有其他细菌病如爱德华氏菌、弧菌、嗜水气单胞菌等的混合感染,加剧罗非鱼的死亡。 三、疾病临床症状 感染无乳链球菌的罗非鱼表现为全身性的充血、出血伴有严重的炎性反应。病鱼表现为食欲减退,游动不稳定呈螺旋状,水面惊吓无反应呈昏睡状,有的停滞在水面,有的身体弯曲。病程较长的罗非鱼表现为角膜发白浑浊、眼球肿大突出,虹膜充血,严重的可见眼球脱落,由于罗非鱼感染无乳链球菌时眼球肿大突出的现象多见,具有一定的示病性,因此养殖户多称此病为“突眼”症。 下颌、鳃盖边缘、鳍条基部不同程度的充血、出血;慢性感染往往出现体表脓肿,尤其是在下颌骨或鳍条基部的位置可见2-3毫米大小的脓肿,尾部可见10-20厘米的大脓肿。急性感染伴有腹水、肛门红肿、外突的现象。解剖可见胃肠道内空无食物,肝脏肿大充血,颜色不均,质地脆弱,胆囊充盈、充满蓝黑色的胆汁。脑膜充血明显,肠道有轻度的充血和炎症,肠腔内有少量黄色的粘液。 进一步的组织病理学观察显示发病罗非鱼肝脏肝细胞呈颗粒变性、肿胀,局部灶性坏死,坏死灶内肝细胞核浓缩、细胞核破裂,甚至有一定区域呈现细胞崩解形成均质红染的无结构物质,并有多量炎症细胞浸润。脑严重水肿,脑基质出现大量间隙,呈海绵状,神经细胞肿胀、变性,神经胶质细胞增多,血管周围间隙明显增宽。肠腔中充斥大量的脱落的上皮细胞、炎性白细胞和均质红染蛋白性渗出物,固有膜血管充血,有大量炎症细胞浸润。眼底部淤血严重,水肿,细胞间隙明显增宽,大量巨噬细胞和嗜中性粒细胞浸润,部分细胞坏死,其胞核固缩或碎裂。 四、致病机理 罗非鱼是无乳链球菌高度敏感的宿主。病原菌如何通过黏膜和组织屏障而侵入血液循环,早期研究提示单核细胞携带细菌或通过其他机制进行散播,如细胞噬菌作用。此外,荚膜多糖在链球菌中具有抗吞噬作用,因此,细胞外链球菌能在血液中自由传播。同时,链球菌对吞噬细胞有一种相对较高的粘附作用,而不是被吞噬,细菌能大量地粘附在巨噬细胞上不被其消化,这可能是持续的菌血症和散布菌源的原因。 链球菌对脑微脉管内皮细胞的粘附作用以及细菌分泌出毒性因子作用于内皮细胞可能对链球菌能穿越血脑屏障有重要有作用。Klesius和Evans等人研究了无乳链球菌胞外产物对尼罗罗非鱼巨噬细胞的趋化活性,表明无乳链球菌的胞外产物能够引起巨噬细胞的趋化现象和化学增活现象,并认为进一步研究无乳链球菌胞外产物与巨噬细胞的特异性反应,以及这种反应是如何引起巨噬细胞游走,吞噬和杀菌力作用,将有助于对无乳链球菌发病机理的研究。 目前报道最多的无乳链球菌毒力因子主要有荚膜多糖,胞外毒素和CAMP因子等。荚膜多糖作为该菌关键的毒力因子,经唾液酸修饰后可钝化宿主旁路补体激活途径进而产生致病作用。无乳链球菌可以产生外毒素,其中β-溶血素,具有溶血性和动物致死性等,可直接破坏宿主组织的结构和功能,导致靶器官的功能紊乱,加之红细胞被外毒素大量破坏,机体最终衰竭死亡。有报道称CAMP因子是无乳链球菌的主要毒力因子。另外,C蛋白β抗原以及无乳链球菌发酵葡萄糖代谢产生的乳酸也可能是无乳链球菌的毒力因子。 五、诊断方法 鱼类生活在复杂的水环境中,水体中存在大量的条件病原体,疾病的发生早期可能是单因素所致,病程越长继发多种病原感染的可能越大,如感染链球菌的病鱼,由于体质严重下降容易继发气单胞菌等条件致病菌感染;而寄生虫病导致的体表破溃性创伤,又容易继发细菌病和真菌病的发生;因此在疾病诊断时要考虑多病原联合感染的可能,综合的考虑多种因素才能做到疾病的快速准确诊断。 此外,鱼病的发生发展是个复杂的过程,存在“多因一症”的现象,如彩虹病毒病、链球菌、假单胞菌和爱德华氏菌等多个细菌性疾病都可能观察到罗非鱼眼球的充血、白浊和凸出的现象;长期使用同一种饲料导致鱼体营养不全或某种营养素缺乏,病鱼也可以观察到“突眼”症。因此,对于罗非鱼无乳链球菌病的快速准确诊断还得需要借助微生物学方法、血清学方法或分子生物学方法。近年来,农业部在水产养殖的重点县市构建了水生动物病害诊断实验室,为基层病害的快速诊断提供条件,基层养殖户在进行疾病的诊断时,可求助于当地的渔政机构或科研院所。 对于罗非鱼无乳链球菌病的确诊可以结合临床症状、病原检测和分子快诊技术:1、观察发病鱼是否具有如嗜睡打转、眼球突出或浑浊发白、脑膜炎、内脏器官及体表出血等典型病理变化;2、采集发病鱼的组织,制备组织触片进行吉姆萨染色,借助光学显微镜油镜观察是否存在成双或成链状的球性细菌;3、在无菌条件下,从发病鱼的组织中是否分离到致病性链球菌,有条件的可采用生化方法、免疫学方法或分子生物学方法对分离细菌进行准确鉴定来确诊。 目前链球菌的商用鉴定系统有RAPIDStrepStrip,Vitecksystem,API20STREP和ATBExpression,这些商用鉴定系统使用方便,准确可靠。本实验室以无乳链球菌的具有高度保守性的荚膜多糖基因和CAMP因子基因为检测序列,成功建立了快速检测罗非鱼无乳链球菌的PCR方法,这个方法具有简便、快速、灵敏、准确和特异性等优点。 六、防治措施 对于罗非鱼无乳链球菌病的防治强调“防重于治”,可以从改善和优化养殖环境、提高饲料质量、增强鱼体自身抵抗力、切断病源传播途径和科学使用疫苗等方面进行罗非鱼疾病的综合防治,除了做好平时的养殖管理外,最好把使用疫苗作为本病预防的重要方法,甚至可提高到首选方法的地位。 在药物防治方面,尤其是平时预防时,我们建议以下用药原则:能不用药则不用,必须用则少用;尽量使用中草药而不是用化学药物,一旦使用化学药物,必须使用制剂,不使用原药,严格遵守休药期。 与此同时,需要提醒各养殖户的是,许多鱼类的病原体也是可以感染人类的,如无乳链球菌都能引起人类的组织感染,尤其是手上有伤口且体质较弱的人员较易感染。 改善水体水质 水环境是鱼类赖以生存的必要条件,水质的好坏直接决定着罗非鱼能否健康、快速的生长。盲目扩大鱼类的养殖密度、强化投饵量都会加重水体的负担,破坏原有的生态平衡。 研究证实高密度放养情况下会增加疾病的发生概率,这是由于密度过大鱼类的抗应激能力下降,加之鱼类代谢产物增多若换水不足,水中溶氧过低易引起水质恶化,使池中亚硝酸盐浓度上升,乃至中毒,并导致鱼体抵抗力下降,从而导致细菌继发性感染如链球菌和嗜水气单胞菌的感染。因此养殖密度不宜过大。 此外,通过改变生态系统的构成来控制某些细菌的过度繁殖,或者使用合理剂量的消毒剂来抑制病原菌的增生是可行的,当然如果在高温季节能有办法降低养殖水温也是非常关键的防病措施,可惜到现在为止我们还没有办法做到。 免疫增强剂 不少研究表明在鱼饵料中添加一些免疫增强剂可以明显提高罗非鱼的免疫力和抗病能力,如全雄奥尼罗非鱼饲料中ß-葡聚糖添加量在1.0%-1.5%时,可以明显改善其生长性能和抗嗜水气单胞菌感染的能力;黄芪多糖能够增加罗非鱼的免疫功能,有抗菌、抗病毒,解毒,抗炎,抗应激等功能;松籽多糖对奥尼罗非鱼有免疫调节作用和较强的抗氧化作用;云芝多糖能够提高奥尼罗非鱼经嗜水气单胞菌攻毒后的存活率。 此外,酵母多糖、维生素C和维生素E等均有提高鱼体免疫力的作用,复合微生态制剂加入奥尼罗非鱼的基础饲料中也被证实能提高奥尼罗非鱼的抗病力。因此,在鱼类饵料中适当加入免疫增强剂可以有效提高鱼体抗病能力。 疫苗 免疫接种是一种相对健康安全的疾病预防措施,虽然鱼类的特异性免疫机制还很不完善,但国内外研究已证实鱼类免疫疫苗对鱼体能够产生免疫保护力。目前罗非鱼上研究最多的是链球菌疫苗。国外从上世纪九十年代中期便开始进行鱼链球菌疫苗的研究:以色列在1995-1997年间研制的海豚链球菌灭活疫苗使虹鳟的链球菌病死亡率从50%下降到5%。美国也于1999年开始着手研制海豚链球菌灭活疫苗,并在罗非鱼免疫保护实验中,产生较好的保护效果,相对保护率高达93.2%。 2009年以来本实验室与通威股份有限公司合作在罗非鱼无乳链球菌的疫苗研究上开展一些工作并取得了一定成绩,研制的注射和口服免疫疫苗实验室免疫保护率分别可达80%和60%。在各方面的不断努力下,国内商品化渔用疫苗的出现指日可待。 中草药治疗 中草药作为天然药物,凭借其无公害、无耐药性、作用广泛等特点受到人们的青睐。中草药在防治鱼类寄生虫病、细菌病和病毒病上发挥着积极的作用。但是由于中草药中有效成分含量较低且用药量大,制剂成本较高,相关的水生动物药效和药动研究基础匮乏等原因,使得中草药在生产上的应用受限。Pongsak和Parichat研究了大蒜、穿心莲、对叶豆、山竺、番石榴和鹊肾树六种草药对尼罗罗非鱼无乳链球菌感染的抗菌作用,发现这六种草药对无乳链球菌均有不同程度的抗菌作用。 化学药物治疗 化学药物治疗疾病是最直接和简便的措施手段,但长期使用或使用不当就难免使病原体产生耐药性导致防治失败,不仅破坏了养殖微生态环境,而且存在的药物残留也会危及人类健康。对于有条件的养殖场,可以通过了解并掌握养殖场内病原菌耐药状况的变化,来筛选有效地疾病预防和治疗用药物。 在药物的使用剂量上,并非“猛药能治病”,超剂量的使用药物不仅不能有效地控制疾病,而且药物无论对养殖水体还是对动物的危害都是很大的。因此,严格按照水产用兽药说明书上规定的剂量使用,是获得良好疗效的前提。 本实验室对2009年海南多地罗非鱼源无乳链球菌进行了药敏检测结果显示,消毒药中戊二醛、戊二醛癸甲溴铵合剂、聚维酮碘的效果较好;以K-B琼脂扩散法对各分离株进行药敏测试,结果显示不同来源的菌株药敏结果差异大,检测的16种药物中,仅第二代头孢类药物美福仙对各菌株具有敏感杀菌作用,其次是强力霉素和四环素,其它药物对各分离株呈现不同的敏感度,药物防治存在难度,各分离株药敏结果见表1。 因而建议用药:1、盐酸强力霉素,每天每千克鱼用药20-50mg,制成药饵,连续投喂5-7d;2、四环素,每天每千克鱼用药75-100mg,制成药饵,连续投喂10-14d;3、有条件的养殖场,可以进行药敏试验结果筛选用药。表1各分离株药敏结果图片 1注:S,敏感;I,中度敏感;R,耐受;“”,未检测。

    疾病流行情况

    一、链球菌病概述

    A、流行季节

    世界范围内由链球菌感染引起鱼类死亡在二十世纪七十和八十年代已有零星报道,九十年代呈上升趋势,目前链球菌已成为主要的鱼类致病菌之一。链球菌主要感染鱼体头部,破坏鱼脑神经,继而通过血液循环破坏肝、肾、脾等器官引发全身性出血病,是一种细菌性疾病,传染性强,死亡率高,治疗困难,且水温越高病情越重。链球菌对养殖品种有一定的选择性,多发于鲑科鱼类、罗非鱼、斑点叉尾鮰、香鱼和淡水白鲳,而草鱼、鲤鱼、鲢鳙鱼未见报道。文献报道感染罗非鱼的链球菌菌株主要是海豚链球菌和无乳链球菌,国内分离到的链球菌菌株多为海豚链球菌,福建省淡水水产研究所首次报道了无乳链球菌引起的罗非鱼暴发性死亡。Robinson和Meyer于1966年第一次报道在淡水鱼金色美鳊(Notemigonus crysoleucas)中分离出B 群属链球菌。随后,Plumb及Baya等从鱼类中分离出的多株非溶血性B群链球菌,但不能确定其归属。至1994年,Eldar等将其定名为Streptococcus difficile。Wilkinson、Elliott及Vandamme 等将分离鉴定的链球菌,大都归属为B群无乳链球菌。2002年,Evans等再次报道溶血性无乳链球菌是鱼类的主要致病菌。2005年,Kawamura等提议重新划分S difficilis的归属,确定为无乳链球菌的同物异名。Evans等2006年从水生哺乳动物中分离出无乳链球菌。无乳链球菌被认为是唯一拥有B群特异性抗原的链球菌。

    本病在我国南方地区流行于春、夏和秋季,高峰为7-9月,流行水温25-37℃,发病率达20-30%,发病鱼的死亡率可高达60-100%。

    二、罗非鱼链球菌病概述

    B、危害对象

    链球菌病多发于水质差、养殖密度大的水域,长期使用低质廉价饲料也是诱因之一。此外,与水体中存在大量的链球菌菌群也有直接的联系。有时在自然发病亲鱼的卵巢中也能检测到病原体的存在,因此,病原体在罗非鱼中可能存在垂直传播的可能性。鱼类链球菌病的病害控制主要有药物防治、生态防治和免疫防治。化学药物和中草药防治是最为直接和简便的控制手段,但长期使用化学药品难免使病原体产生耐药性,导致防治失败,同时也可能导致产品中的药物残留引起质量卫生安全问题。因此,生态防治和免疫防治为重要的控制手段。无乳链球菌是鱼类重要致病菌之一,同时也是人畜共患的病原菌之一,在养殖中除了要投放无病原携带苗种,保持良好的水质环境,全程投喂优质饵料外,追查病原体的传染源,切断其传播途径是生态防治的重要工作。链球菌病一旦发生,既感染脑部,破坏脑神经,又损坏肝、肾等器官,影响鱼体的自身免疫机能,疫苗和免疫激活剂的研制和开发是控制无乳链球菌导致的罗非鱼暴发性流行病的主流方向。

    无乳链球菌病主要以水平方式传播,体表有损伤或受环境应激过大的鱼易感染发病。2010年以前疾病主要威胁100g以上的稚鱼到1kg左右的成鱼,2011年苗种也大面积暴发链球菌病。

    三、罗非鱼链球菌病流行概况

    C、流行区域

    罗非鱼链球菌病常常在水温长期过高、缺氧或养殖密度过大等情况下暴发,于春、夏和秋季发生,流行高峰为5-9月,流行水温25-37℃,尤其水温高于30℃时易导致疾病暴发;主要危害亲鱼及100g以上的幼鱼和成鱼。传染性强,发病率达20-30%,发病鱼的死亡率达80%以上,病程持续时间长,死亡高峰持续2-3周;在低温季节,死亡率相对较低,但持续时间更长。我国主要罗非鱼养殖区如海南、广东、广西、福建等地区近年均不同程度的暴发,导致了较为严重的损失。

    我国海南、广西、广东和福建四大养殖区,2008年以前呈局部慢性发病,2009年7月大面积发病率高达40%,死亡率接近100%,造成的经济损失高达7.02亿人民币。之后该病如期而至,且发病区域越来越广,发病时间越来越早,严重影响了养殖户养殖积极性,病害也给当地罗非鱼产业造成了巨大的经济损失。

    四、主要症状与病理变化

    疾病临床症状

    罗非鱼链球菌病的主要症状有:患病病鱼逐渐失去平衡,有的在水中翻滚,有的侧身做圆圈运动;病情严重时,临死前病鱼于水面打转或间隙性窜游;腹部体表具点状或斑块出血或溃疡,下颚及两鳃盖下缘有弥漫性出血,肝脏、胆囊、脾脏肿大、出血,严重时糜烂;肠道和胃积水或积黄色粘液,肛门突出;眼球充血、肿大、突出,严重的眼角膜混浊发白,甚至眼球脱落。病理切片显示鳃小片充血、水肿、坏死,呼吸上皮增生、融合,毛细血管肿胀、充血,鳃丝末端充血膨大,淋巴细胞浸润;心外膜破裂,肌纤维断裂、紊乱、松散心肌炎性水肿,淋巴细胞浸润; 肝脏颗粒变性和脂肪变性,动脉管与肝实质细胞分离,管壁堆积血细胞和肝细胞核,血铁黄素沉着,肝细胞浑浊、肿胀、坏死;肠道粘膜上皮坏死、脱落,固有膜炎性白细胞浸润;脾脏出血、水肿,淋巴细胞减少,组织内有大量含铁血黄素沉着;肾脏组织内有化脓灶,内有大量嗜中性白细胞浸润,肾小体肿胀,中央毛细血管血液淤积肾小囊腔隙增大,肾小管细胞增大、排列不规则,小动脉血管壁玻璃样变性,血管内形成微血栓,上皮细胞坏死;眼球脉络膜和眶骨膜组织出现炎性损伤,晶状体纤维断裂和脱离,严重者被囊和晶状体坏死,出现角膜溃烂,视网膜损伤。

    A、活动情况

    五、罗非鱼链球菌病诊断

    发病初期体色加深或发黑,游动缓慢,常在塘边、水面无方向性地缓慢游动,有时身体屈曲,逐渐失去平衡,有的在水中翻滚,有的侧身做圆圈运动。病情严重时,临死前病鱼于水面打转或间隙性窜游。

    以无菌器具解剖病鱼,分别取鳃、肝脏、肾脏、脾脏、性腺、眼球等器官的小块组织或鳃盖内侧膜内积液,于洁净载玻片涂片,风干后,革兰氏染色,于油镜下检查,可发现革兰氏阳性的链状球菌,发现较多的为成对球菌,病情严重时可发现典型链状细菌,结合鱼体症状可基本确诊。确认病原体的种类可通过细菌的分离鉴定或免疫学病原检测方法确认。

    B、体表症状

    六、暴发的因素分析

    部分病鱼眼球突出及出血,单眼或双眼角膜混浊发白,水晶体及玻璃体也混浊,甚至眼球脱落。下颚及两腮盖下缘有弥漫性出血,腹部体表具点状或斑状出血甚至溃疡。

    养殖环境条件、养殖模式和养殖品种与链球菌的发病率密切相关,养殖密度高、养殖水源受畜禽污染、保持高量投喂全人工配合饲料的发病率高;高温与疾病暴发和导致高死亡率密切相关,而一旦温度下降,死亡率显着下降;养殖品种与发病率也有关系,这可能是与鱼体摄食量高,生长速度快有关;与鱼体规格相关,100g以上的鱼体发病率高,这可能也与摄食量和生长迅速相关;发病鱼体未采取隔离措施,疾病在不同池塘及养殖区的水平传播;另外,在部分自然发病的亲鱼性腺中有时也能检测到病原,是否存在垂直传播还需要进一步的研究。由于链球菌为人畜共患的病原菌之一,畜禽污染是否是传染源也值得探讨。

    C、剖解症状

    七、罗非鱼链球菌病防控对策

    肝脏、胆囊、脾脏肿大,特别是在急性链球菌暴发的早期病鱼内脏。最明显的症状是胆囊肿大,有的比正常的体积大数倍。严重时溃烂,肠道和胃积水或积黄色粘液。

    由于病原为革兰氏染色阳性细菌,预防和治疗较革兰氏染色阴性细菌更为困难。链球菌的防控主要措施有: 1、加强对养殖水环境的控制,使用微生物制剂和底质改良剂,调节水质,维持良好的水质环境条件。在疾病暴发的高温季节,降低饲养密度,增加开增氧机的时间,保持良好的水质环境,尤其是水源受畜禽养殖污染的区域,应严格控制污染水源的流入,并降低投饵量,在有条件的情况下可降低水温。 2、加强对疾病的管理,病死鱼及时捞出,作无害化处理,并加强对疾病的隔离,隔离发病池与健康池的水、工具和人员。 3、在疾病流行季节和易暴发季节,加强对病原数量的控制,如环境和鱼体内病原数量的控制。养殖环境使用消毒剂,如氯制剂、氧化剂、海因类等,消毒池水,减少环境病原数量和传染率;鱼体携带的病原一般采用口服敏感药物加以控制,但使用口服药物时,要注意药物的种类、剂量和用药周期,药物的种类要选择敏感药物或复配制剂,如选用青霉素、氨苄青霉素、多西四环素、米诺环素、磺胺类等对G+细菌敏感药物;药物剂量要能确保药物利用后能有效杀灭和抑制病原繁殖的剂量,一般使用剂量要达到50mg/kg鱼以上;药物使用周期一般要达7-10天以上。 4、提高鱼体的体质,加强非特异性免疫机能的提高。如在饲料中添加维生素C和免疫多糖、酵素等免疫增强剂,提高鱼体机能,有效抵抗病原对机体的危害。 5、在疾病治疗时,更应注重环境条件和鱼体机能的提高,在应用上述药物的同时,鱼体肝脏及其它内脏功能的改良,如使用654-2等内服,对疾病的辅助控制具有显着的效果。 6、免疫预防和治疗的研究技术正在开展,要想真正有效地控制疾病的传播,免疫预防和治疗一定是最重要的手段,在现阶段国内广西水产研究所、中山大学、珠江水产研究所、福建省淡水水产研究所等单位均在开展链球菌疫苗的研究。

    在急性感染时,链球菌迅速达到血液并扩散至全身各组织器官,出现内脏的广泛出血和肝、脾、肾、心、脑、眼和肠道的大面积出血,脾和肾脏肿大。

    八、存在的问题

    病原学特征

    由于罗非鱼链球菌病的研究还不够深入,如其是否存在垂直传播?是否与畜禽污染有关还不得而知。养殖品种是否与病原敏感相关等问题有待进一步确认。2010年,海南省在4月份即呈点状发生,说明链球菌病的发生时节在不断延伸,也意味链球菌病可能在2010年广泛流行,因此,需要行业主管部门、科技工作者和养殖业者的相互配合和努力,加强对流行病学的调查与监控,加强对病原菌株的收集与分析,才能为免疫防治技术的研究、开发提供所必要的基础材料。虽然目前还不能确认本病是否具有垂直传播途径,苗种检疫不但能佐证是否存在垂直传播,还能有效控制疾病的蔓延,因此,笔者建议有关单位应对苗种开展检疫工作。

    A、链球菌分类

    暴发性罗非鱼链球菌主要由无乳链球菌引发,往往伴有其它细菌病如爱德华氏菌、弧菌、嗜水气单胞菌等的混合感染。

    B、链球菌理化特性。

    无乳链球菌菌体为圆形或卵圆形,直径约为2μm,链状或成对排列,常呈成长链排列,无鞭毛,无芽孢,无运动性。无乳链球菌为兼性厌氧菌。大多数无乳链球菌菌株最适温度为36-37℃,最适pH值为7.4-7.6。

    致病机理

    A、散播机理

    罗非鱼是无乳链球菌高度敏感的宿主。病原菌如何通过黏膜和组织屏障而侵入血液循环,早期研究提示单核细胞携带细菌或通过其他机制进行散播,如细胞噬菌作用。

    B、毒力因子

    链球菌对脑膜内皮细胞的粘附作用以及细菌分泌出毒性因子作用于内皮细胞可能对链球菌穿越血脑屏障有重要有作用。

    疾病诊断方法

    临床症断

    观察发病鱼是否具有如嗜睡打转、眼球突出或浑浊发白、脑膜炎、内脏器官及体表出血等典型病理变化。

    病原检测

    采集发病鱼的组织,制备组织触片进行基姆沙染色,也可进行细菌分离培养,进行革兰氏染色,借助光学显微镜油镜观察是否存在成双或成链状的球性细菌。

    分子快诊技术

    在无菌条件下,从发病鱼的组织中是否分离到致病性链球菌,可采用生化方法、免疫学方法或分子生物学方法对分离细菌进行准确鉴定来确诊。

    目前我们使用无乳链球菌具有高度保守性的荚膜多糖基因和CAMP因子基因为检测序列,成功建立了快速检测罗非鱼无乳链球菌的PCR方法,这个方法具有简便、快速、灵敏、准确和特异性等优点。

    疾病暴发原因分析

    养殖环境差

    养殖密度过高、水源受到畜禽粪尿的污染、长期投喂质量比较差的人工配合饲料的池塘,往往发病率就比较高。

    水温变幅大

    疾病发生大多在高温季节,尤其是水温变化幅度大时,链球菌病的暴发和高死亡率均比较高,因此疾病的发生与否与温度的变化密切相关。一般而言,当养殖水体温度高,发病率与死亡率就均比较高,而当温度一旦下降,其发病率和死亡率就可能显著下降。

    鱼体自身差异

    链球菌病发病与鱼体自身差异有一定的相关性,比如品种、体质差异都会引起鱼体感染疾病的易感性不同。

    病原菌耐药性增强

    较差的水体、底质环境为链球菌的生长和繁殖提供的适宜条件,加之现在抗生素药物的滥用,使链球菌不断变异,产生强耐药性,同时对鱼体肝脏解毒功能造成更大的负荷。

    疾病防治措施

    针对罗非鱼无乳链球菌病的防治,动物保健研究所以“以防为主、快诊早治、合理用药”十二字方针为指导思想,历经三年实验室基础理论研究和生产试验,建立了一套“罗非鱼链球菌病综合防治技术”,该技术主要从易感动物罗非鱼、传播媒介水环境和病原菌无乳链球菌三方面入手,以快速诊断技术、独家的水质调节技术、免疫增强技术、特异性免疫、配方优化和药物防治等为技术手段。

    综合技术的应用有效地降低了链球菌病的发病死亡率,由以往的死亡率30%以上减少到少发病甚至不发病,同时综合技术的应用提高了产量,使罗非鱼养殖户从连年亏损的打击中重获信心。

    2012年综合防治技术在海南全面推广,海南通威产品全面升级。

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